淺談常用的反相填料常選擇技巧

　　聚合物調料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要優點是在PH值為1～ 14均可使用。 相對與硅膠基質的YMC C18填料，這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白 質等樣品的分離非常有效。 現在的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料，色譜柱柱效較低。

　　其它HPLC的無機填料色譜柱也已經商品化。由于其特殊的性質，一般僅限于特殊的 用途。如石墨化碳也用于正逐漸成為反相填料。這種填料的分離不同與硅膠基質烷基 鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎，不再需其它的表面改性，該柱填料一般比烷基 鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強，石墨化碳可用于分離某些幾何導構體，又由 于HPLC流動相中不會被溶解，這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可用于HPLC， 氧化鋁微粒剛性強，可制成穩定的色譜柱柱床，其優點是可在PH高達12的流動相中使用。 但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強，應用范圍受到一定的限制，所以未能廣泛應用， 新型氧化鋯填料也可用于HPLC，商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應 用PH范圍1～14，溫度可達100℃。由于氧化鋯填料幾年才開始研究，加之面臨的實驗難 度，其重要用途與優勢尚在進行中。

　　目前，商品化的色譜料粒度從1um到超過30um均有銷售，而目前分析分離主要用3um， 5um和10um填料，填料的粒度主要影響填充柱的兩個參數，即柱效和背壓。粒度越小，填 充柱的柱效越高;小于3um的填料應用，在相同選擇性條件下，提高柱效可提高分離度， 但不是的因素。如果固定相選擇是正確，但是分離度不夠，那么選擇更小粒度的填料 是很有用的，3um填料填充柱的柱數比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而， 3um的色相譜的背壓卻是5um的2倍。與此同時，柱效提高意味著在相同條件下可以選擇更 短的色譜柱，以縮短分析時間，另外，可以采用低粘度的溶劑做流動相或增加色譜柱的使 用溫度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色譜柱的壓力。