凝膠過(guò)濾填料的特點(diǎn)和使用方法

　　凝膠過(guò)濾，或尺寸排阻，是一種簡(jiǎn)單、的層析方法，用于蛋白或生物大分子的純化。

　　凝膠過(guò)濾填料是由葡聚糖苷和3-氯-1，2環(huán)氧丙烷以醚鍵相互鉸鏈而成，不同型號(hào)的葡聚糖凝膠用英文字母G表示，如G-25，G-75等，G后面的數(shù)字為凝膠吸水量再乘以10。sephacryl：為葡聚糖偶聯(lián)丙烯基，再和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成的介質(zhì)。它有較高的硬度，能承受比普通凝膠更大的靜水壓力，由于屬于部分大網(wǎng)孔型凝膠，可用于分離蛋白質(zhì)、核酸、多糖和蛋白聚糖甚是病毒顆粒。

　　凝膠過(guò)濾填料特點(diǎn)：

　　1、適合用有機(jī)溶劑分離嗜脂性分子，可以非常經(jīng)濟(jì)地大規(guī)模制備各種天然產(chǎn)物

　　2、結(jié)合凝膠過(guò)濾、分配色譜及吸附性層析于一身，分離結(jié)構(gòu)非常相近的分子

　　3、載量可高達(dá)300mg樣品/ml凝膠，極少需要再生，分離效果可保持十幾年不變。

　　凝膠過(guò)濾填料使用方法：

　　⒈凝膠的選擇根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌x擇不同型號(hào)的凝膠。如果實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菍悠分械拇蠓肿游镔|(zhì)和小分子物質(zhì)分開(kāi)，由于它們?cè)诜峙湎禂?shù)上有顯著差異，這種分離又稱組別分離，一般可選用SephadexG-25和G-50，對(duì)于小肽和低分子量的物質(zhì)（1000-5000）的脫鹽可使用SephadexG-10，G-15及Bio-Gel-p-2或4.如果實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菍悠分幸恍┓肿恿勘容^近似的物質(zhì)進(jìn)行分離，這種分離又叫分級(jí)分離。一般選用排阻限度略大于樣品中最高分子量物質(zhì)的凝膠，層析過(guò)程中這些物質(zhì)都能不同程度地深入到凝膠內(nèi)部，由于Kd不同，最后得到分離。

　　⒉柱的直徑與長(zhǎng)度根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，組別分離時(shí)，大多采用2-30cm長(zhǎng)的層析柱，分級(jí)分離時(shí)，一般需要100cm左右長(zhǎng)的層析柱，其直徑在1-5cm范圍內(nèi)，小于1cm產(chǎn)生管壁效應(yīng)，大于5cm則稀釋現(xiàn)象嚴(yán)重。長(zhǎng)度L與直徑D的比值L/D一般宜在7-10之間，但對(duì)移動(dòng)慢的物質(zhì)宜在30-40之間。

　?、衬z柱的制備凝膠型號(hào)選定后，將干膠顆粒懸浮于5-10倍量的蒸餾水或洗脫液中充分溶脹，溶脹之后將極細(xì)的小顆粒傾瀉出去。自然溶脹費(fèi)時(shí)較長(zhǎng)，加熱可使溶脹加速，即在沸水浴中將濕凝膠漿逐漸升溫至近沸，1-2小時(shí)即可達(dá)到凝膠的充分脹溶。加熱法既可節(jié)省時(shí)間又可消毒。

　　凝膠的裝填：將層析柱與地面垂直固定在架子上，下端流出口用夾子夾緊，柱頂可安裝一個(gè)帶有攪拌裝置的較大容器，柱內(nèi)充滿洗脫液，將凝膠調(diào)成較稀薄的漿頭液盛于柱頂?shù)娜萜髦?，然后在微微地?cái)嚢柘率鼓z下沉于柱內(nèi)，這樣凝膠粒水平上升，直到所需高度為止，拆除柱頂裝置，用相應(yīng)的濾紙片輕輕蓋在凝膠床表面。稍放置一段時(shí)間，再開(kāi)始流動(dòng)平衡，流速應(yīng)低于層析時(shí)所需的流速。在平衡過(guò)程中逐漸增加到層析的流速，千萬(wàn)不能超過(guò)最終流速。平衡凝膠床過(guò)夜，使用前要檢查層析床是否均勻，有無(wú)“紋路”或氣泡，或加一些有色物質(zhì)來(lái)觀察色帶的移動(dòng)，如帶狹窄、均勻平整說(shuō)明層析柱的性能良好，色帶出現(xiàn)歪曲、散亂、變寬時(shí)必須重新裝柱。