凝膠過濾填料的特點和使用方法

　　凝膠過濾，或尺寸排阻，是一種簡單、的層析方法，用于蛋白或生物大分子的純化。

　　凝膠過濾填料是由葡聚糖苷和3-氯-1，2環氧丙烷以醚鍵相互鉸鏈而成，不同型號的葡聚糖凝膠用英文字母G表示，如G-25，G-75等，G后面的數字為凝膠吸水量再乘以10。sephacryl：為葡聚糖偶聯丙烯基，再和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成的介質。它有較高的硬度，能承受比普通凝膠更大的靜水壓力，由于屬于部分大網孔型凝膠，可用于分離蛋白質、核酸、多糖和蛋白聚糖甚是病毒顆粒。

　　凝膠過濾填料特點：

　　1、適合用有機溶劑分離嗜脂性分子，可以非常經濟地大規模制備各種天然產物

　　2、結合凝膠過濾、分配色譜及吸附性層析于一身，分離結構非常相近的分子

　　3、載量可高達300mg樣品/ml凝膠，極少需要再生，分離效果可保持十幾年不變。

　　凝膠過濾填料使用方法：

　　⒈凝膠的選擇根據實驗目的不同選擇不同型號的凝膠。如果實驗目的是將樣品中的大分子物質和小分子物質分開，由于它們在分配系數上有顯著差異，這種分離又稱組別分離，一般可選用SephadexG-25和G-50，對于小肽和低分子量的物質（1000-5000）的脫鹽可使用SephadexG-10，G-15及Bio-Gel-p-2或4.如果實驗目的是將樣品中一些分子量比較近似的物質進行分離，這種分離又叫分級分離。一般選用排阻限度略大于樣品中最高分子量物質的凝膠，層析過程中這些物質都能不同程度地深入到凝膠內部，由于Kd不同，最后得到分離。

　　⒉柱的直徑與長度根據經驗，組別分離時，大多采用2-30cm長的層析柱，分級分離時，一般需要100cm左右長的層析柱，其直徑在1-5cm范圍內，小于1cm產生管壁效應，大于5cm則稀釋現象嚴重。長度L與直徑D的比值L/D一般宜在7-10之間，但對移動慢的物質宜在30-40之間。

　　⒊凝膠柱的制備凝膠型號選定后，將干膠顆粒懸浮于5-10倍量的蒸餾水或洗脫液中充分溶脹，溶脹之后將極細的小顆粒傾瀉出去。自然溶脹費時較長，加熱可使溶脹加速，即在沸水浴中將濕凝膠漿逐漸升溫至近沸，1-2小時即可達到凝膠的充分脹溶。加熱法既可節省時間又可消毒。

　　凝膠的裝填：將層析柱與地面垂直固定在架子上，下端流出口用夾子夾緊，柱頂可安裝一個帶有攪拌裝置的較大容器，柱內充滿洗脫液，將凝膠調成較稀薄的漿頭液盛于柱頂的容器中，然后在微微地攪拌下使凝膠下沉于柱內，這樣凝膠粒水平上升，直到所需高度為止，拆除柱頂裝置，用相應的濾紙片輕輕蓋在凝膠床表面。稍放置一段時間，再開始流動平衡，流速應低于層析時所需的流速。在平衡過程中逐漸增加到層析的流速，千萬不能超過最終流速。平衡凝膠床過夜，使用前要檢查層析床是否均勻，有無“紋路”或氣泡，或加一些有色物質來觀察色帶的移動，如帶狹窄、均勻平整說明層析柱的性能良好，色帶出現歪曲、散亂、變寬時必須重新裝柱。